RT-PCR試劑盒是一種用于檢測RNA的高效工具，其核心原理是將RNA反轉錄為cDNA，再通過PCR技術擴增目標序列。具體工作流程如下：
 

　　1.RNA提取：從樣本中提取高質量RNA，常用方法包括TRIol法或磁珠法，確保RNA完整性和純度。
 

　　2.逆轉錄(Reverse Transcription, RT)：利用逆轉錄酶(如MMLV逆轉錄酶)將RNA轉化為互補DNA(cDNA)。此過程需依賴特異性引物(如Oligo(dT)18引物或隨機引物)，在低溫條件下啟動反轉錄反應，生成單鏈cDNA。
 

　　3.PCR擴增：將cDNA作為模板，通過設計特異性引物靶向目標序列，在DNA聚合酶作用下進行指數級擴增。試劑盒通常提供預優化的反應緩沖液(含dNTP、Mg等成分)，確保擴增效率。部分試劑盒采用兩管式操作，將RT與PCR分步進行，便于單獨優化反應條件。
 

　　RT-PCR試劑盒的儲存需嚴格遵循試劑特性、組分分類和廠家說明書要求，核心原則是低溫、避光、防潮、避免反復凍融，通常包含多種功能組分，不同組分的穩定性差異較大，需分開儲存：
 

　　酶類組分
 

　　核心成分：反轉錄酶、TaqDNA聚合酶、酶緩沖液等。
 

　　儲存條件：-20℃±5℃低溫冷凍儲存，部分高活性酶需-80℃長期保存。
 

　　注意事項：避免與水、易揮發試劑同放；嚴禁反復凍融(反復凍融會導致酶活性下降)，建議分裝成單次使用量后儲存。
 

　　核酸類組分
 

　　核心成分：引物、探針、陽性對照、陰性對照、RNA酶抑制劑等。
 

　　儲存條件：未開封時-20℃儲存；開封后若短期使用(1周內)可4℃冷藏，長期使用仍需-20℃分裝凍存。
 

　　注意事項：RNA類對照易降解，需全程避光、防RNA酶污染(如使用無酶槍頭、離心管)。
 

　　*其他輔助組分
 

　　核心成分：PCR 反應液、染料、稀釋液、裂解液等。
 

　　儲存條件：多數可 4℃ 冷藏保存，部分含易分解成分的裂解液需 -20℃ 凍存。
 

　　注意事項：避免陽光直射；含醇類的裂解液需密封儲存，防止揮發。